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動物源性食品中的敵百蟲、敵敵畏與蠅毒磷樣品前處理方法

點擊次數:2524  更新時間2021-07-16  【關閉

    敵百蟲、敵敵畏與蠅毒磷均屬于有機磷農藥,作為一種殺蟲劑,有機磷農藥具有廣譜、高效、低毒、使用方便等特點,廣泛應用于農業、畜牧業、水產、林業等方面的防蟲或殺蟲工作。有機磷農藥的廣泛使用,在給人們增加利益的同時也給環境造成了嚴重的污染。大量食用含有等農藥殘留的食物會導致機體正常生理功能的失調,引起病理改變和毒性危害。因此,為保障動物源性食品的安全,我國農業農村部和國家市場監督管理總局2019年發布的GB 31650-2019《食品安全國家標準食品中獸藥最大殘留*》中明確規定了敵畏在牛和豬靶組織中的殘留*。

     

    本文闡述了如何將敵百蟲、敵敵畏與蠅毒磷從樣品基質中分離提取出來,并經過凈化后,轉化成液質聯用儀可以檢測的形式。以提取、凈化為重點,依據國標GB 23200.94-2016,為檢測人員和相關領域研究人員提供一定的參考。

     

    檢測項目:敵百蟲、敵敵畏與蠅毒磷

     

    應用范圍:畜、禽分割肉、鹽漬腸衣和蜂蜜

    液相色譜-質譜/質譜法

    方法原理:試樣中的敵百蟲、敵敵畏與蠅毒磷用二氯甲烷或乙酸乙酯提取,提取液經濃縮、脫脂后,用液相色譜-質譜/質譜儀測定,外標峰面積法定量,子離子豐度比定性。

    前處理儀器:

    分析天平(感量0.01 g 和0.0001 g);超聲波清洗器;旋渦混勻器;旋轉蒸發儀;離心機(5000 r/min);均質器;0.45 μm微孔濾膜。

    檢測儀器:UHPLC-MS/MS+ESI源

     

    試樣的制備與保存

    1. 分割肉

    取樣品中有代表性的約500 g,用組織搗碎機搗碎,裝入潔凈容器作為試樣,密封并做好標識。

    2. 腸衣

    取有代表性樣品約100 g,用剪刀剪碎至2 毫米以下,裝入潔凈容器作為試樣,密封并做好標識。

    3. 蜂蜜

    取有代表性樣品約500 g,攪拌均勻后裝入潔凈容器內密封并做好標識。

    試樣保存與制樣要求:分割肉、腸衣、蜂蜜等試樣于零下18 ℃ 以下冷凍保存。在制樣的操作過程中,應防止樣品受到污染或發生殘留物含量的變化。

     

     

    前處理方法

    1.分割肉

    準確稱取5 g均勻試樣(精確至0.01 g)于50 mL具塞離心管中,加入5 g無水硫酸鈉混勻,再加入15 mL二氯甲烷,用均質器(10000 r/min)均質2 min,4000 r/min離心3 min,將有機相轉移至100 mL梨形蒸餾瓶中,殘渣再用2×10 mL二氯甲烷均質提取兩次。離心合并有機相,于40 ℃旋轉蒸發至2 mL,將樣液轉移至5 mL刻度試管中,并用少量二氯甲烷洗滌梨形蒸餾瓶,合并洗滌液到刻度試管中,室溫通氮濃縮至干。定量加入1.0 mL乙腈溶解殘渣,加入2 mL環己烷旋渦混勻2 min后,2500 r/min離心3 min,將下層乙腈相過0.45 μm微孔濾膜后,供液相色譜-質譜/質譜儀測定。

    2.腸衣

    準確稱取5 g試樣(精確至0.01 g)于50 mL具塞離心管中,加入2 g無水硫酸鈉混勻,再加入15 mL二氯甲烷,蓋上蓋混勻,置于超聲波清洗器中超聲30 min,冷卻后將有機相過濾轉移至100 mL梨形蒸餾瓶中,殘渣再用2×10 mL二氯甲烷混勻超聲提取兩次,離心合并有機相,于40 ℃旋轉蒸發至2 mL,將樣液轉移至5 mL刻度試管中,并用少量二氯甲烷洗滌梨形蒸餾瓶,合并洗滌液到刻度試管中,室溫通氮濃縮至干。定量加入1.0 mL乙腈溶解殘渣,加入2 mL環己烷旋渦混勻2 min后,2500 r/min離心3 min,將下層乙腈相過0.45 μm微孔濾膜后,供液相色譜-質譜/質譜儀測定。

    3.蜂蜜

    稱取5 g試樣(精確至0.01 g)于50 mL具塞離心管中,加入10 mL水和25 mL乙酸乙酯,于旋渦混合器上混勻1 min,以3000 r/min離心5 min,將上層乙酸乙酯提取液收集于濃縮瓶中,殘渣再加入20 mL乙酸乙酯,重復上述操作,合并乙酸乙酯提取溶液。在50 ℃ 以下減壓濃縮至約3 mL后轉移至10 mL離心管中,用5 mL乙酸乙酯分兩次洗滌濃縮瓶,合并洗滌液于離心管中,用氮氣吹干。加1.0 mL乙腈溶解殘渣,并過0.45 μm微孔濾膜后,供液相色譜-質譜/質譜儀測定。

     

    國標解讀&

    注意事項

    1.標準物質用甲醇配成100 μg/mL的標準儲備液,在0 ℃~4 ℃冷藏避光保存,可使用3個月。

    2.本方法中肉類和腸衣的提取凈化方式為:二氯甲烷提取三次,無水硫酸鈉除水,環己烷除脂;蜂蜜的的提取凈化方式為:水溶解后,乙酸乙酯提取兩次。三種基質均相當于5 g試料上機檢測。

    3.根據基質中含水量的多少,調整無水硫酸鈉的用量。

    4.本方法采用多次提取的方式提高目標化合物的回收率。

    5.本方法使用基質曲線進行定量,還可以使用三種化合物相對應的同位素內標配制標準曲線,進行回收率的校正。

     

    參考文獻

    GB 23200.94-2016 食品安全國家標準 動物源性食品中敵百蟲、敵敵畏與蠅毒磷殘留量的測定 液相色譜-質譜/質譜法

    圖1 分割肉中敵百蟲、敵敵畏與蠅毒磷殘留量測定的前處理流程圖

    圖2 腸衣中敵百蟲、敵敵畏與蠅毒磷殘留量測定的前處理流程圖

    圖3 蜂蜜中敵百蟲、敵敵畏與蠅毒磷殘留量測定的前處理流程圖

     

    表1  敵百蟲、敵敵畏與蠅毒磷信息表

     

    文章來源:標準物質中心

     

     

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