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一定不能錯過!動物性食品中氮哌酮及代謝物殘留量測定的前處理方法

點擊次數:1621  更新時間2021-06-25  【關閉

    動物性食品中氮哌酮及代謝物殘留量測定的前處理方法

    氮哌酮的危害及檢測目的

    氮哌酮是一種丁酰苯類神經安定藥,動物使用后可消除緊張感,使其活動力下降,對環境淡漠并長期處于安靜狀態。有助于降低因應激及創傷引起的死亡率,因此在長途運輸中常常給豬等動物使用該藥。氮哌醇是氮哌酮在動物體內的代謝產物,與原藥氮哌酮的化學結構相近,是氮哌酮的殘留標示物。通過食物鏈氮哌酮及其代謝產物氮哌醇會對人體產生直接的危害。為此我國農業農村部和國家市場監督管理總局2019年發布的GB 31650-2019《食品安全國家標準食品中獸藥最大殘留*》中明確規定了氮哌酮及其殘留標示物氮哌醇在豬靶組織中的殘留*。

    本文闡述了如何將氮哌酮及其代謝物從樣品基質中分離提取出來,并經過凈化后,轉化成高效液相色譜可以檢測的形式。以提取、凈化為重點,依據國標GB 29709-2013,為檢測人員和相關領域研究人員提供一定的參考。

    檢測項目:氮哌酮、氮哌醇

    應用范圍:豬的肌肉、皮+脂、肝臟和腎臟

    高效液相色譜法

    方法原理:試樣中殘留的氮哌酮和氮哌醇用乙腈萃取,正己烷除脂,MCX柱凈化,高效液相色譜測定,外標法定量。

    前處理儀器:

    分析天平(感量0.01 g 0.00001 g);冷凍高速離心機;氮吹儀;旋渦混合器;固相萃取裝置;超聲波清洗機;均質機;離心管;濾膜(0.2 μm)。

    檢測儀器:HPLC +PDA

     

    樣品的制備保存

    取新鮮或冷凍空白組織供試組織去除筋膜絞碎并使均質

    取均質后的供試樣品,作為供試試料。

    取均質后的空白樣品,作為空白試料。

    取均質后的空白樣品,添加適宜濃度的標準工作液,作為空白添加試料。

    試料于零下20  以下保存

     

    前處理方法

    1.提取

    稱取試樣5 g±0.05 g,于離心管中,加乙腈10 mL,旋渦混合1 min,超聲2 min5000 r/min離心5 min,取上清液,殘渣中加乙腈10 mL重復提取一次,合并兩次上清液。于40 水浴旋轉蒸干2 %甲酸水溶液5 mL溶解殘余物,加正己烷4 mL,混勻,5000 r/min離心5 min,棄正己烷層液,備用。

    2.凈化

    MCX柱依次用甲醇3 mL、水3 mL2 %甲酸水溶液3 mL活化,取備用液過柱,控制流速小于1 mL/min,用2 %甲酸水3 mL和甲醇3 mL淋洗,抽干,用5 %氨化甲醇4 mL洗脫。收集洗脫液,于40 氮氣吹干用流動相(乙腈-乙酸銨溶液1+11.0 mL溶解殘余物,旋渦混勻,供高效液相色譜法測定。

     

    國標解讀及注意事項

    1.氮哌酮和氮哌醇標準物質用甲醇配成1 mg/mL標準儲備液,在零下20  以下避光保存有效期3 個月。

    2.本方法使用乙腈兩次提取目標化合物,正己烷除脂,陽離子交換柱富集凈化,相當于5 g試料進行上機檢測。

    3.MCX柱凈化方法為“酸上樣,堿洗脫”。

    4.氨水甲醇溶液現用現配,避免氨水揮發,影響洗脫效果;洗脫過程中洗脫溶劑少量多次加入,可以增加洗脫率

    5.固相萃取過程中需要控制流速,使溶液一滴一滴地流下,以保證離子交換的效果。

     

    參考文獻

    GB 29709-2013 食品安全國家標準 動物性食品中氮哌酮及代謝物多殘留的測定 高效液相色譜法

     

    1 豬組織中氮哌酮和氮哌醇殘留量測定的前處理流程圖

    文章來源 壇墨質檢 

    壇墨質檢
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